Study of protein profile and immunochemical reactivity for extracts of D. farinae, D. pteronyssinus and B. tropicalis mites in the city of Rio de Janeiro, Brazil
Estudo do perfil proteico e reatividade imunoquímica dos extratos dos ácaros D. farinae, D. pteronyssinus e B. tropicalis na cidade do Rio de Janeiro, Brasil
Francisca das Chagas Sobral Silva Mihos; Patrícia Ribeiro Pereira; Anderson Bruno de Almeida Matos; Caio Velloso Mergh; Maria Queiroz da Cruz
Abstract
Objective: In tropical countries like Brazil, the mapping of protein constituents of mite extracts becomes relevant in the context of therapeutic evaluations of respiratory allergic diseases. In addition, this allows to set up an internal national database of the population’s sensitization profile. Extracts are complex mixtures containing different proportions of biological materials, and the determination of their protein profile is necessary for an improved performance in diagnosis and therapy. Therefore, in this study, we used electrophoresis to characterize the protein constituents of B. tropicalis, D. farinae and D. pteronyssinus extracts, and evaluated the reactivity of specific immunoglobulins from atopic volunteers from the city of Rio de Janeiro, Brazil. Methods: Samples of the extracts were subjected to precipitation with acetone and applied to polyacrylamide gel 12.5%. After the electrophoretic run, samples were transferred to a 0.45 μm nitrocellulose membrane, followed by incubation with the serum pool. Bands related to antigenantibody reactivity were obtained by the colorimetric method, using peroxidase conjugated to secondary antibody. Results: The results obtained showed that protein precipitation favored the visualization of bands in the polyacrylamide gel; homogeneity was evidenced by experiment reproducibility and low standard deviation values. With regard to electrophoretic profile, the extracts showed specific proteins in their composition, with positive reactivity to the immunochemical test. Conclusion: One may infer that mite extracts in Brazil present different allergens when compared to extracts described in the American and European literature, warranting the development of new, specific criteria for extract standardization.
Keywords
Resumo
Objetivo: Em países tropicais, como o Brasil, o mapeamento dos constituintes proteicos de extratos de ácaros torna-se informação relevante quando se pretende fazer avaliações terapêuticas de doenças alérgicas respiratórias, além de contribuir para a construção de um banco de dados interno do país. Os extratos apresentam-se como misturas complexas contendo diferentes composições de material biológico, sendo necessária a determinação do seu perfil proteico para um melhor desempenho em diagnóstico e terapia. Assim, este estudo analisou a eletroforese das proteínas constituintes dos extratos de B. tropicalis, D. farinae e D. pteronyssinus e avaliou a reatividade das imunoglobulinas específicas de soros de voluntários atópicos da cidade do Rio de Janeiro, Brasil. Métodos: Amostras dos extratos foram submetidas a precipitação com acetona e aplicadas em gel de poliacrilamida 12,5%. Após a corrida eletroforética, as amostras foram transferidas para membrana de nitrocelulose de 0,45 µm, seguido da etapa de incubação com pool de soros. As bandas referentes à reatividade antígeno-anticorpo foram obtidas pelo método colorimétrico, utilizando-se a peroxidase conjugada a anticorpo secundário. Resultados: Os resultados obtidos mostraram que a precipitação proteica favoreceu a visualização das bandas no gel, mostrando sua homogeneidade pela reprodutibilidade dos experimentos e seu baixo desvio padrão. Também quanto ao perfil eletroforético, os extratos apresentaram proteínas específicas em sua constituição, tendo reatividade positiva ao teste imunoquímico. Conclusão: Pode-se inferir que os extratos de ácaros obtidos no Brasil apresentam alérgenos diferentes quando comparados com extratos proteicos apresentados na literatura americana e europeia, o que torna necessária a criação de critérios próprios de avaliação para padronização dos extratos.
Palavras-chave
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Submetido em:
20/03/2017
Aceito em:
28/06/2017
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